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近期我院感染傳染科肝病研究團(tuán)隊(duì)王建設(shè)教授課題組于世界著名老牌肝臟病雜志《Liver International》發(fā)表題為《MYO5B-associated diseases: novel liver-related variants and genotype-phenotype correlation》的研究論著。該研究由復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院攜手重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、湖南省兒童醫(yī)院、南京市第二醫(yī)院等多家肝病中心及復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院合作完成。
MYO5B基因編碼的蛋白隸屬于Ⅴ型肌球蛋白家族，主要由Motor、IQ、Coiled Coil及Globular tail四個(gè)功能結(jié)構(gòu)域組成，參與細(xì)胞內(nèi)囊泡運(yùn)輸。2008年國(guó)際上首次發(fā)現(xiàn)其是一種嚴(yán)重致死性的先天性腹瀉（微絨毛包涵體?。┑闹虏』?。2017年王建設(shè)教授領(lǐng)銜的肝病團(tuán)隊(duì)鑒定了MYO5B缺陷引起新的表型-單純低γ谷氨酰胺(GGT)膽汁淤積癥，表現(xiàn)為從進(jìn)行性家族性膽汁淤積癥(PFIC)到良性復(fù)發(fā)性肝內(nèi)膽汁淤積癥(BRIC)和暫時(shí)性新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥(TNC)的連續(xù)的疾病譜，類(lèi)似于家族性肝內(nèi)膽汁淤積癥(FIC)1型和2型。同時(shí)該課題組基于有限的患者進(jìn)行基因型-表型關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)雙等位嚴(yán)重變異（包括無(wú)義、框移及經(jīng)典剪切突變）僅見(jiàn)于微絨毛包涵體病，而單純低GGT膽汁淤積患者則至少攜帶一個(gè)非嚴(yán)重變異(Hepatology 2017，PMID: 28027573)。隨后王建設(shè)課題組與荷蘭Sven教授研究團(tuán)隊(duì)合作基于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果提出MYO5B完全缺失不會(huì)導(dǎo)致低GGT膽汁淤積，保留Rab11a結(jié)合位點(diǎn)的突變蛋白通過(guò)毒性獲得(gain-of-toxic)導(dǎo)致膽汁淤積 (Hepatology 2020，PMID: 31750554)。這一理論主要基于體外實(shí)驗(yàn)提出，迫切需要臨床數(shù)據(jù)的支持。
新的研究中，王建設(shè)教授課題組攜手國(guó)內(nèi)多家兒童肝病醫(yī)療中心和復(fù)旦生物醫(yī)學(xué)研究院專(zhuān)家回顧性收集2017年1月至2021年3月臨床及基因新確診且尚未報(bào)道的MYO5B缺陷患者，詳細(xì)分析其臨床特征及突變信息；同時(shí)文獻(xiàn)收集2021年3月以前報(bào)道的MYO5B缺陷患者，其臨床符合低GGT膽汁淤積或微絨毛包涵體病診斷，MYO5B雙突變經(jīng)ACMG分級(jí)評(píng)定為致病、可能致病或臨床意義未明則納入本次研究，是目前MYO5B缺陷病基因型-表型關(guān)系最大樣本量的研究，并且首次對(duì)肝病表型和基因不同功能域細(xì)分，進(jìn)行更深入的基因型-表型關(guān)系分析，對(duì)于MYO5B疾病致病機(jī)制的認(rèn)識(shí)和患者的精細(xì)管理具有重要意義。
本研究共報(bào)道來(lái)自11個(gè)家系的12例新MYO5B缺陷患者，其中10例表現(xiàn)為單純低GGT膽汁淤積，1例表現(xiàn)為持續(xù)性低GGT膽汁淤積伴T(mén)PN非依賴(lài)的長(zhǎng)期慢性腹瀉，1例為微絨毛包涵體病伴高GGT膽汁淤積。此外，7例患者生長(zhǎng)發(fā)育明顯落后于同齡兒童，2例患者有膽囊結(jié)石。12例新患者攜帶的突變中，14個(gè)為新發(fā)突變，其中6個(gè)為null variants（無(wú)功能變異：包括無(wú)義突變、移碼突變、經(jīng)典剪切突變、起始密碼子變異、單個(gè)或多個(gè)外顯子缺失），8個(gè)為non-null variants。本研究不僅拓寬了MYO5B缺陷病突變譜，個(gè)別新患者表現(xiàn)為持續(xù)性低GGT膽汁淤積伴T(mén)PN非依賴(lài)的長(zhǎng)期慢性腹瀉還提示MYO5B缺陷病本身呈譜系改變，且可能與腸-肝循環(huán)密切相關(guān)。
文獻(xiàn)回顧共收集到118例MYO5B雙等位基因變異患者，加上本研究的12例新患者，共130例患者納入基因型-表型關(guān)系研究。作者將所有患者按照攜帶無(wú)功能變異的個(gè)數(shù)分為雙等位無(wú)功能變異(Biallelic null)、單個(gè)無(wú)功能變異(Single null)及零個(gè)無(wú)功能變異(Biallelic non-null)三種基因型組；根據(jù)腹瀉和膽汁淤積癥狀的表現(xiàn)情況分為三種臨床表型組：一種是單純MVID患者(MVID)，患者以頑固性水瀉為主要表現(xiàn)，無(wú)膽汁淤積相關(guān)記錄；一種是單純低GGT膽汁淤積患者(FIC)，患者以持續(xù)性/復(fù)發(fā)性/暫時(shí)性低GGT膽汁淤積為主要表現(xiàn)，無(wú)明顯胃腸道癥狀；一種是MVID患者伴膽汁淤積或FIC患者伴需短時(shí)靜脈營(yíng)養(yǎng)治療的慢性/間斷性腹瀉的雙表型(Combined)；FIC患者內(nèi)部進(jìn)一步根據(jù)膽汁淤積特征分為持續(xù)性(Persistent)、良性復(fù)發(fā)性(Recurrent)以及暫時(shí)性膽汁淤積(Transient)三種臨床表型亞組。研究結(jié)果進(jìn)一步支持雙等位無(wú)功能變異僅見(jiàn)于MVID，F(xiàn)IC患者至少攜帶一個(gè)預(yù)測(cè)保留Rab11a結(jié)合能力的突變。斯皮爾曼等級(jí)相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)MYO5B缺陷患者腸道癥狀嚴(yán)重程度與其攜帶的無(wú)功能變異個(gè)數(shù)呈正相關(guān)(ρ = 0.299, P = .001)；FIC患者膽汁淤積嚴(yán)重程度同樣與其是否攜帶無(wú)功能變異具有相關(guān)性，患者攜帶無(wú)功能變異傾向于表現(xiàn)為持續(xù)性膽汁淤積(ρ = 0.420, P = .029)。
作者進(jìn)一步將至少攜帶一個(gè)錯(cuò)義/非框移突變的患者納入疾病表型與突變所在MYO5B蛋白結(jié)構(gòu)域的關(guān)系研究。結(jié)果顯示MVID組(25/25, 100%) 和Combined組(30/31, 97%) 患者攜帶定位于MYO5B蛋白Motor區(qū)的錯(cuò)義/非框移突變的比例明顯高于FIC組(19/29, 66%, P = .001和 P = .002)；相反，F(xiàn)IC組(16/29, 55%)患者攜帶定位于MYO5B蛋白非Motor區(qū)的錯(cuò)義/非框移突變的比例明顯高于MVID組(3/25, 12%, P = .001)和Combined組(3/31, 10%, P = .000)。另外，攜帶錯(cuò)義/非框移變異位于MYO5B蛋白IQ區(qū)的患者僅表現(xiàn)為FIC (P = .000)，其中錯(cuò)義變異c.2470C>T/p.Arg824Cys（預(yù)測(cè)影響IQ區(qū)功能）在8例患者中檢測(cè)到，是FIC患者中最常見(jiàn)的突變位點(diǎn)。作者因此最終提出攜帶錯(cuò)義/非框移變異定位于MYO5B蛋白非Motor區(qū)，尤其是IQ區(qū)的患者更可能表現(xiàn)為單純低GGT膽汁淤積，這對(duì)于預(yù)測(cè)患者臨床表現(xiàn)以及指導(dǎo)MYO5B蛋白各結(jié)構(gòu)域的功能研究有重要意義。
復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院的王利博士、丘倚靈博士后以及重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院的許紅梅教授為該論文的共同第一作者，王建設(shè)教授為通訊作者。復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院、重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、湖南省兒童醫(yī)院、南京市第二醫(yī)院的多名臨床醫(yī)生以及復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院的邢清和教授為共同作者。在此感謝各位作者、合作者以及給予幫助的同道，感謝患者及其家屬的支持和配合。
復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院王建設(shè)教授帶領(lǐng)的肝病團(tuán)隊(duì)長(zhǎng)期致力于兒童肝病研究，在國(guó)際上率先鑒定了遺傳性肝病多個(gè)新的致病基因。自鑒定MYO5B缺陷引起肝病的新表型以后，該課題組通過(guò)多年來(lái)的病例積累，現(xiàn)又根據(jù)基因型-表型關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)MYO5B突變的性質(zhì)和所在不同功能結(jié)構(gòu)域與疾病表型有密切的內(nèi)在聯(lián)系，將為MYO5B疾病的認(rèn)識(shí)及患者的個(gè)性化管理提供指引。未來(lái)，該團(tuán)隊(duì)將持續(xù)深入進(jìn)行MYO5B缺陷相關(guān)肝病的致病機(jī)理和相關(guān)代償機(jī)制研究，以期為兒童罕見(jiàn)遺傳性肝病，尤其是MYO5B缺陷相關(guān)肝病患者及其家庭帶來(lái)治愈的希望。
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